浅谈HPV的分型检测

【摘要】宫颈癌是妇科最常见的恶性肿瘤之一，它是迄今为止唯一找出治病原因的癌症。人乳头瘤病毒（human papillomavirus HPV）的感染是宫颈癌发病的必要条件，99.8%的宫颈癌患者中可以检测到生殖道HPV病毒的感染。高危型人乳头瘤病毒的持续感染是导致宫颈癌前病变的及宫颈癌发生、发展的主要因素。

【关键词】人乳头瘤病毒；宫颈癌；高危型

宫颈癌在女性肿瘤的发生率位居第二，是女性健康的“第二杀手”。据统计，我国每年新增宫颈癌病例约13.5万。HPV感染在宫颈癌的发生、发展中起到重要的作用。因此，HPV的筛查及高危型HPV的检测对降低宫颈癌前病变及宫颈癌的发生率十分重要。

一、HPV的结构与分型

 HPV是小环状双链DNA病毒，在自然界中以裸核休眠状态存在，即便在无宿主的寒冷条件下HPV也能独立存活数月，是人类目前所知道的唯一的病毒宿主。HPV为高特殊种群选择病毒，具有强烈嗜上皮性、高度组织和宿主特异性，可致人类皮肤及黏膜异常增生。基因组分为早期区（E区）、晚期区（L区）和长调控区（LCR）三个功能区。

HPV不能通过免疫学方法进行血清分型，主要通过HPV L1区的DNA杂交及酶谱分析的方法，将DNA同源性小于50%的HPV定义为新亚型。目前已经确认的亚型有100余种，至少有42种能感染人类生殖道上皮细胞。HPV6、11、40、42、43、44、54、61、72和81等型别被认为是低危型，与宫颈大部分良性病变有关；HPV16、18、31、35、39、45、51、52、56、58、59、,68、78和82等型别被认为是高危型，与宫颈癌关系密切。其中HPV16和HPV18型是最常见的高危型HPV。HPV16型多见于宫颈鳞癌，而HPV18型则多见于宫颈腺癌。

二、HPV的感染率和年龄的关系

HPV感染通常是没有症状的，它是世界上第一大传染疾病。全世界每年有约10－15%的新发病例。HPV的感染因素包括初次性生活的年龄、性伴侣数、吸烟、长期口服避孕药、免疫缺陷和抑制等。年龄是影响HPV感染率最重要的因素之一。HPV感染率随年龄分布呈V形，感染率最低的年龄组为30-34岁，两个高峰分别为20-24岁和40-49岁年龄组。60%以上机体在6个月左右能依靠自身免疫机制逐渐将HPV感染清除；当病毒或宿主的基因发生突变或宿主的防御机制发生缺陷时，则可诱导HPV-DNA片段整合到宿主细胞的DNA上，使得相应基因调控失调，30%以上会发展成宫颈癌。

三、HPV分型的检测方法

过去，因缺少高灵敏度和特异性的HPV诊断试剂，大约70%的感染者在最初的两年是无法检测到HPV的。大部分感染了HPV的妇女将会发展为轻度宫颈损伤，约15%的HPV感染者将会在两年内发展为重度损伤，而重度宫颈损伤极有可能发展为恶性癌变。

传统上，宫颈涂片检测是群体筛查的常规手段，属于细胞学检测方法。此方法以观察作为诊断基础，受取材、涂片制作质量、阅片技术影响，其准确率低，假阴性高，重复性差，漏诊率可达30%。在检查和筛选HPV的基因型方法中，实时荧光PCR法及杂交捕获法最为常用，但是实时荧光PCR法所需要的设备比较昂贵，且操作繁琐，不适合于对子宫颈癌的大规模筛查。杂交捕获法试剂盒无须PCR扩增即可检测出临床样品中的HPV DNA，并且可区别高危型和低危型两类，但是此类试剂盒无法鉴定出感染HPV的具体基因型。

PCR实验室又叫基因扩增实验室。聚合酶链反应（PCR）是一种先进的基因检测技术，具有高度敏感性、特异性、快速、简便等特点。通过对病变组织或可疑部位样品提取DNA，利用特异引物对目标DNA进行扩增。当某种病原微生物含量极少时，传统的检测方法难以检出，但通过PCR技术可将DNA片断扩增到百万倍以上，能精确检测出病毒在患者体内存在的数量、是否复制、是否传染、传染性有多强，及时判断病人最适合使用哪类抗病毒药物，判断药物疗效如何，有利于各种感染性疾病的病原学诊断，从而为临床治疗提供可靠的检验依据。

我院检验科PCR实验室于2016年8月购进了获得美国专利技术的Hybribio杂交仪和SLAN-96S扩增分析仪，正式启动HPV分型检测项目，利用荧光PCR方法进行21分型和12+2分型检测。标本为宫颈分泌物（女性）和尿道分泌物（男性）。由于标本量较多，检验科指派三名专业技术人员每天进行HPV分型检测，为广大患者提供准确及时的检验服务，也热忱欢迎各位的咨询和指导。咨询电话：0891-6928269。